常夏石竹的繁殖方法

2021-09-09 01:55

一、配制培养基

根据不同需要,严格精确地称取各种化学试剂,配成不同类型的培养基。愈伤组织诱导培养基为MS+2mg/L6-BA;分化培养基为MS+lmg/L6-BA+0.1mg/LNAA;生根培养基为MS+0.1mg/LIAA+0.Img/LIBA。高压灭菌条件为120℃,1.1-1.2个大气压,20分钟。

二、培养方法

1.愈伤组织培养。将常夏石竹幼枝在清水中洗净,剪去叶片和大部分茎段,取茎尖和腋芽部分,再冲洗1-2次,淋干。在超净工作台上,先用75%的乙醇浸泡茎尖30-60秒,再用0.1%hgcl2浸10分钟,最后用无菌水冲洗数次。用镊子和解剖刀取出包括生长点的组织切块,接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:每天光照10-12小时,光照度为1000-2000Lx,温度为25℃左右。大约15-25d后,接种的外植体就可以膨大,形成愈伤组织,1周后,可将愈伤组织进行继代培养或分化培养。

2.继代培养。将愈伤组织在无菌条件下,从试管或培养瓶中取出,用镊子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养基,并用无菌水反复清洗数次,直至愈伤块上无残留培养基为止。用解剖刀将愈伤块切成数个小块,再接种到装有愈伤组织诱导培养基的培养瓶中,在与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。几天后,培养瓶中的小愈伤块即可逐渐长大,这一过程可反复操作。通过愈伤组织的继代培养,原来接种的一个茎尖组织可繁殖出大量的新枝,用于分化培养。

3.分化培养。将愈伤组织在无菌条件下,从试管或培养瓶中取出,用无菌水洗净,切成小接种块,接种到装有分化培养基的培养瓶中,分化培养的条件同愈伤组织培养。大约1个月以后,愈伤组织就可分化出芽,并继续长出新枝。当分化出的新枝长到1-2cm或分化出一定数量后,将这些小幼苗在无菌条件下取出,进行生根培养或重新诱导分化。

4.生根培养。当培养瓶中的幼苗长到2cm左右时,将幼苗在无菌条件下取出,放人装有生根培养基的培养瓶中培养,培养条件同分化培养。大约半个月后,幼苗即可生根。

5.炼苗。当幼苗的根长到一定程度,幼苗形体已显健壮时,将幼苗取出,在清水中洗净附着在根上的培养基(注意:一定要严格洗净,否则会烂根)。将洗净的幼苗排好,用清水喷湿,在温度15℃-25℃、湿度60%-80%的条件下炼苗12-24小时。

6.移栽。炼苗后,将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化,每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水,大约15-20d后,视幼苗长势,即可移栽到苗圃中。

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