对发情母牛适时配种可以提高受胎率，因此需要确定排卵时间和配种适宜时间。决定母牛配种时间的因素包括排卵时间、卵子保持受精能力的时间以及精子在母牛生殖道内保持受精能力的时间。母牛通常在发情结束后5～15小时排卵，卵子在排卵后6～12小时内保持受精能力，而精子在母牛生殖道内保持受精能力的时间为24～48小时。
将冻精放入40℃温水中解冻，解冻后在显微镜下检查，确保无问题后进行授精。操作时，手握成锥形，在石蜡油润滑作用下伸入发情母牛直肠内，帮助母牛排出宿便。随后，手伸入直肠较深处，摸到子宫角检查卵巢及子宫状况，并顺势握住子宫颈，轻轻滑动以刺激母牛性兴奋。使用专业工具如输精枪，并由专业人员完成输精操作。