1．液体菌种生产工艺流程
摇瓶空灭→摇瓶培养基的制作→灭菌→冷却→接种→培养→摇床培养→发酵罐清洗→发酵罐空灭→发酵罐培养基的生产→灭菌→冷却→接种→菌丝培养→接栽培袋→栽培袋培养
2．摇瓶液体菌种的制备
（1）摇瓶空灭
使用1000毫升、耐126℃高温的无色或近无色的玻璃抽滤瓶，在压力0.15兆帕，温度121℃条件下灭菌30分钟。
（2）摇瓶培养基配方
配方1：去皮马铃薯300克，葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，消泡剂5毫升，水1000毫升，pH自然。
配方2：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，蛋白胨2.5克，VB11毫克，水1000毫升，pH自然。
（3）摇瓶培养基的制备
按培养基配方称取原料，先将去皮马铃薯切成小块，加热至沸腾维持20～30分钟，用纱布过滤定容后，将滤液放入锅中，加入其他原材料小火加热至溶解蒸煮至溶解，待培养基冷却后分装放入摇瓶，摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的1/4，在摇瓶中放入一粒转子。将瓶口和胶皮管口用棉塞塞紧，棉塞外要加盖4层纱布，灭菌时纱布外加盖牛皮纸防潮。
（4）灭菌、冷却与接种
将摇瓶放入高压灭菌锅中，在压力0.15兆帕，温度121℃条件下灭菌30分钟，灭菌完毕后，应自然降压，灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。待培养基冷却后接种，在接种箱或者超净工作台中接种，接种前先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后开紫外灯灭菌30分钟，在液体培液表面接4块黄豆大的母种菌种块，使菌丝面朝上，菌种块必须漂浮在液体上，接种结束后塞紧棉塞。
（5）培养
将接种后的摇瓶先放入恒温箱中在25℃下静止培养2～3天，待接种块在培养液上长到1厘米时放入摇床培养，温度26℃，转速以调至有一分钱硬币大小的旋涡为基准，摇30分钟，停10分钟，自动控制，维持3～4天。
判断标准：摇瓶摇动后菌丝挂壁，培养液浑浊度达90%以上，如有臭味，则表明有杂菌污染，不可使用。
3．发酵罐液体菌种的制备
（1）发酵罐的清洗
发酵罐在每次使用后或再次使用之前必须对其进行彻底的清洗才能投料使用，洗罐主要是除去罐壁的菌球、菌块料液及其它污物，操作时用自来水管冲洗内壁，对于内壁粘附的污物可用木棒包上一些软布擦拭即可。
（2）发酵罐的空灭
需要进行空灭主要有几种情况：一是新发酵罐初次使用时；二是上一罐感染杂菌时；三是发酵罐长时间不用时；四是更换品种时。以上四种情况都要进行空灭，如果是连续生产或者上一批生产完只需将罐洗干净就可以进入下批生产不需要空灭。
空灭时发酵罐内层及夹层加水至视镜中线，启动加热器加热，首先排完夹层和内层的冷空气，然后关闭所有的阀门升温升压，温度升至100℃，0.05兆帕压力下，打开接种口放气阀，排放罐内冷空气；在温度达到121℃～125℃，压力在0.12～0.15兆帕时维持30～40分钟；压力降至0.05兆帕时，打开接种阀，使罐内的水通过接种管及接种枪排出，关闭接种阀门，将接种枪放在装有75%酒精的塑料袋（瓶）内，使其无菌，以备接种使用。
（3）发酵罐培养基配方
700升发酵罐推荐配方为：豆粕粉10千克，葡萄糖700克，白砂糖7千克，硫酸镁700克，消泡剂50毫升。
（4）发酵罐培养基的生产
按照发酵罐培养基配方称取原料，培养基熬制同摇瓶培养基的方法，熬好后放入发酵罐中，再加入热的消泡剂，打开气泵搅拌，加水至视镜中线定溶。
（5）灭菌、冷却与接种
开启加热器对发酵罐夹层及内层加热，当温度达到0.05兆帕时打开接种口放冷气至接种口蒸汽变直时关闭接种口，待培养液温度升至95℃时，打开气泵对发酵罐进行搅拌5分钟，气泵停止通气，当压力达到0.12～0.15兆帕时，温度为121℃开始记时，灭菌40分钟。
培养基灭菌结束后迅速通水降温，降温过程中发酵罐要适当通气，一方面搅拌降温；另一方面加压，使发酵罐维持正压，尽快使发酵罐温度降至30℃以下。
将摇瓶接种管和发酵罐接种口用75%酒精消毒，用95%酒精的火焰圈套在接口上，轻微打开呼吸器阀门，使发酵罐压力为0，点燃火焰圈，将摇瓶接种管放在火焰上方，用灭菌消毒过的镊子去掉接种管上的牛皮纸和棉塞，将胶管插入接种口，打开接种口阀门，将摇瓶菌种注入发酵罐中，关闭接种阀门，然后拔出接种胶管，去掉火焰圈，打开气泵。
（6）培养
通气后调节呼吸器，使内罐压力稳定在0.01～0.03兆帕，当培养72小时后即可看出小米粒状的菌丝球，呼吸器排出的培养料香味随着培养周期的延长越来越淡，到培养后期取而代之的是一种淡淡的菌液的清香味，菌丝球浓度和菌液粘度逐渐增加，玉木耳液体菌种培养周期为7～8天，培养好的液体取样后放置5分钟基本不分层，且菌球大小均匀，颗粒分明，菌球周边菌丝明显。最好在发酵培养第四天对液体进行取样回接平板，培养三天后观察其状态，挑出不能接菌的污染罐。
（7）接种
接种前应认真检查选择优质菌种：方法为发酵结束停进气后静止观察，菌球下沉，上清液澄清透明，表面无或有少量泡沫，菌球表面菌丝呈发散状，说明菌种正常；若上清液浑浊，菌球表面光滑说明菌种不正常。
液体菌种培养好以后，将接种胶管和接种枪提前灭菌，接种房间也应提前消毒，若在离子风机的保护下接种效果更佳；接种时先放掉一部分菌种，尽量减少感染机会，用接种枪把料面用液体菌种封住，一般每袋接种量25～30毫升即可。
4．栽培袋培养
将接好菌种的栽培袋放在发菌架上，要求菌袋不能被划破，放在架子上时不能将菌袋刮到培养架横梁上，防止出现微孔而污染。具体摆放应根据不同的培养条件而定，可以立放，也可以卧放，条件允许的话可以采用单层立放为最好。培养25天左右，菌袋基本能够长满菌丝，长满袋后还需要后熟6～7天。