①直接观察法发情开始后12小时~18小时；接受其它牛爬垮，由烦躁转为安静；粘液量少，浑浊状或透明而浓稠。
②阴道检查法外阴肿胀开始消失，子宫颈口呈大蒜瓣状、粉红或带紫褐、湿润、开张良好。
③直肠检查法通过直肠检查触摸两侧卵巢上的卵泡发育情况来确定母牛是否发情，根据卵泡是否突出于卵巢表面及大小、弹性、波动性和排卵来判断是否发情及配种或输精的适期。发情初期卵巢有所增大，卵泡部分突出于卵巢表面其直径在8毫米以下，较硬；到卵泡成熟期，卵泡呈球突出于卵巢表面，其直径可达10毫米~24毫米，卵泡壁变薄，富有弹性，有一触即破之感。同时，触摸子宫角后子宫有收缩感。卵巢上有直径在1.5厘米左右的卵泡，并有一触即破之感。